图位克隆程序主要包括以下步骤：
建立目的基因的遗传分离群体
通过杂交纯合突变体与野生型个体，创建F1代，并进一步自交得到F2代或其他遗传分离群体。
找到与目的基因紧密连锁的分子标记
利用微卫星标记、SNP标记等分子生物学技术，找到与目的基因紧密连锁的分子标记。
用遗传图或物理作图将目的基因定位在染色体特定位置
通过遗传连锁分析和物理图谱技术，将目的基因定位在染色体的特定区域。
构建含有大插入片段的基因组文库
从目的基因区域附近提取DNA，构建含有大插入片段的基因组文库。
以与目的基因连锁的分子标记为探针筛选基因组文库
使用与目的基因连锁的分子标记作为探针，筛选基因组文库，找到含有目的基因的阳性克隆。
用阳性克隆构建目的基因区域的跨叠群
通过多次筛选和验证，构建目的基因区域的重叠群（BAC重叠群）。
通过染色体步移、登陆或跳查，获得含有目标基因的大片段克隆
利用染色体步移、DNA测序等技术，从重叠群中分离出含有目标基因的大片段克隆。
通过亚克隆获得目标的小片段克隆
将大片段克隆进一步亚克隆，获得目标基因的小片段克隆。
通过遗传转化和功能互补验证，最终确定目标基因的碱基序列
将小片段克隆转入细菌或其他表达系统中，通过功能互补实验验证基因功能，最终确定目标基因的碱基序列。
建议
精确的遗传图谱和物理图谱：确保有高精度的遗传图谱和物理图谱作为参考，以便准确定位目的基因。
高质量的基因组文库：构建高质量的基因组文库，确保筛选到的阳性克隆具有较高的可信度。
多次验证：在每一步骤中都要进行多次验证，确保结果的准确性。
功能验证：在确定目标基因的碱基序列后，要通过遗传转化和功能互补实验进行验证，确保基因功能的正确性。
通过以上步骤，可以系统地进行图位克隆，最终成功克隆出目标基因。
